產(chǎn)品描述：Vaccinia Capping enzyme是經(jīng)大腸桿菌表達、純化的來(lái)源于牛痘病毒的重組蛋白。能特異性將7-甲基鳥(niǎo)苷酸帽子結構(cap 0) 加至RNA的5'端。cap結構有助于真核生物mRNA的穩定，轉運，翻譯。Vaccinia Capping enzyme由D1R，D12L雙亞基組成，具有三種酶活性（RNA三磷酸酶活性，鳥(niǎo)苷酸轉移酶活性；鳥(niǎo)嘌呤甲基轉移酶活性）。在體外轉錄，加帽過(guò)程需要Vaccinia Capping enzyme，GTP，甲基供體(SAM)。

來(lái)源：重組大腸桿菌

規格：10U/μL

活性單位定義：1單位酶活定義為37℃，1小時(shí)摻入10 pmols GTP到80nt轉錄產(chǎn)物所用的酶量。

酶存儲緩沖液：20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA, 100mM NaCl, 1mM DTT, 0.1%(v/v) Triton X-100, 50%(v/v) glycerol.

配套溶液：10X Capping Buffer, Cat#ON-073, 500mM Tris-HCl, pH8.0, 50mM KCl, 10mM MgCl₂, 10mM DTT; S-adenosylmethionine (SAM), 32mM, Cat#ON-074; 10mM GTP, ON-075.

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Poly(A) Polymerase, Cat#ON-126

mRNA Cap-2'-O-Methyltransferase, Cat#ON-014

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10X Capping Buffer, Cat#ON-073

10mM GTP, Cat#ON-075

S-adenosylmethionine (SAM),32mM, Cat#ON-074

1. 反應體系中不能含有EDTA；

2. 如為了RNA的穩定性，而加入核糖核酸酶抑制劑，按手冊中反應體系加入至終濃度為1U/μL即可；

3. 在pH7.0-8.0，SAM不穩定，每次反應前需要新稀釋SAM至2mM；

4. 在反應前，應對RNA進(jìn)行熱處理，保證轉錄產(chǎn)物的5'末端二級結構打開(kāi)；對高二級結構的RNA可以提高熱變性條件，如65℃ 20分鐘，或75℃ 10分鐘，或85℃ 5分鐘；

5. Vaccinia Capping Enzyme 和 2'-O-methyltransferase 可以一起反應用于生產(chǎn)Cap1結構的RNA；

6. 對部分已知的含有復雜5'結構的RNA,反應時(shí)間可以延長(cháng)至3小時(shí)。

儲藏溫度：-20℃

質(zhì)控檢測：無(wú)DNase，RNase污染

純度：SDS-PAGE純度：大于95%

1. Otto J.P. Kyrieleis, Jonathan  Chang, Marcos de la Pena, et al. Structure. 22, 452-465(2014).

2. Konarska, M.M. et al., (1984) Cell 38, 731.

3. Kuge, H. et al., (1998) Nucl. Acids Res. 26, 3208.