產(chǎn)品描述：Poly(A) polymerase是 以ATP為底物對RNA的3'羥基端添加腺苷酸形成polyA尾部結構。
來(lái)源：重組大腸桿菌
規格：5U/μL
活性單位定義：1單位活性定義為20μL的反應體系，37℃、10分鐘內，摻入1nmol AMP 到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量。
酶存儲緩沖液：20mM Tris-HCl (pH7.5, 25℃), 1mM EDTA, 300mM NaCl, 1mM DTT, 0.1%(v/v) Triton X-100, 50%(v/v) glycerol
配套溶液：10X poly(A) Polymerase Reaction Buffer, Cat#ON-127, 500mM Tris-HCl, (pH7.9, 25℃), 2.5M NaCl, 100mM MgCl2.
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操作流程：本流程適用于小于10μg的RNA添加150bp長(cháng)度的poly(A)尾部結構。來(lái)源于IVT反應的RNA需要純化后，才能用于poly(A)加尾反應。
1. 按下列配方配置反應液：
| RNA | 1~10μg |
| 10X poly(A) Polymerase Reaction Buffer | 2μL |
| ATP(10mM) | 2μL |
| Poly(A) polymerase | 1μL |
| (可選) Rnase inhibitor | 20units |
| Nuclease-free H2O | to 20μL |
2. 37度保溫60分鐘
3. 終止反應，加入EDTA至終濃度大于11mM
* 熱變性的RNA可能會(huì )提高加尾反應的效率
儲藏溫度：-20℃
質(zhì)控檢測：無(wú)DNase、Nickase、RNase污染
純度：SDS-PAGE純度：大于95%
1. Bernstein P and Ross J (1989) Poly(A), poly(A) binding protein and the regulation of mRNA stability. Trends Biochem Sci 14: 373–377.
2. Gallie DR (1991) The cap and poly(A) tail function synergistically to regulate mRNA translational efficiency. Genes Dev 5: 2108–2116.
3. Krug, M.S. and Berger, S.L. (1987) Methods Enzymol. 152, 262.