產(chǎn)品描述:M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Plus是一種以RNA為模板的DNA聚合酶, 可以長(cháng)片段mRNA為模板合成dDNA。M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Plus 能夠以單鏈DNA為模板進(jìn)行延伸,無(wú)需添加DNA polymerase。
來(lái)源:重組大腸桿菌
規格:200U/μL
活性單位定義:1單位活性定義為37℃、10分鐘內,摻入1nmole的dNTP到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量。
酶存儲緩沖液:50mM Tris-HCl pH 7.5, 25℃, 0.1mM EDTA,100mM NaCl, 0.1% Triton X-100, 1mM DTT, 50%(v/v) Glycerol.
配套溶液:5×RT Reaction Buffer. Cat#ON-067, 250mM Tris-HCl (pH8.3, 25℃),375mM KCl, 15mM MgCl2, 50mM DTT.
相關(guān)產(chǎn)品推薦:
M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Minus, Cat#ON-047
反應體系:
1. 在合成第一鏈DNA之前,將引物(約0.5μg)與模板(最高2μg)預先加熱70℃ 5min,冰浴5min。加熱可以打開(kāi)模板中的二級結構,冷卻是阻止二級結構的再次形成。
2. 向已經(jīng)退火的引物/模板添加下述溶液:
M-MLV reverse transcriptase, RNase H plus | 50-200U |
5×RT Reaction Buffer | 5μL |
RNasin | 20U |
dNTP (10mM each) | 1.25μL |
Total | 25μL |
3. 37℃ (若使用隨機引物)60min,或者42℃(若使用其它引物)60min. 延伸溫度可以在37℃和42℃之間優(yōu)化。
儲藏溫度:-20℃
質(zhì)控檢測:無(wú)DNase、Nickase、RNase污染
純度:SDS-PAGE純度:大于95%
1. Yu Chen, Weiguo Xu,Qining Sun, Biotechnol Lett. 31, 1051–1057 (2009).
2. Monica J. Roth, Naoko Tanese, and Stephen P. Goff, The Journal Of Biological Chemistry. 260, 9326-9335(1985).