產(chǎn)品描述：Alkaline Phosphatase, TAB5 非特異性的催化DNA和RNA 5'和3'端的磷酸單酯鍵，也可以催化NTPs和dNTPs。80℃ 2 min可完全失活。
來(lái)源：重組大腸桿菌
規格：2.5U/μL
活性單位定義：1單位活性定義為37℃，30分鐘內，對限制性?xún)惹忻缸饔玫?'端內陷的1μg pUC19 質(zhì)粒去磷酸化所用的酶量。去磷酸化定義為在自連反應中對自身環(huán)化的抑制率＞ 95%，通過(guò)轉化到DH5α進(jìn)行判斷。
酶存儲緩沖液：10mM Tris-HCl , 1mM MgCl2, 0.01mM ZnCl2, 50%(v/v) glycerol, pH7.4, 25℃.
配套溶液：10X Phosphatase Reaction Buffer, Cat#ON-180, 500mM Bis-Tris-Propane-HCl , 10mM MgCl2, 1mM ZnCl2, pH6, 25℃.
相關(guān)產(chǎn)品推薦:
High Yield T7 RNA Synthesis Kit, Cat#ON-040
反應流程：
DNA為底物：
1. 按下列配方配置反應液：
| 5'-Phosphate-DNA | 1μg |
| 10X Phosphatase Reaction Buffer | 2μL |
| Alkaline Phosphatase, TAB5 | 2.5~5 units |
| Nuclease-free H2O | To 20μL |
2. 37度保溫30分鐘
3. (可選）80度2分鐘熱失活Alkaline Phosphatase, TAB5。
RNA為底物：
1. 按下列配方配置反應液：
| 5'-Phosphate-RNA | 1μg |
| Nuclease-free H2O | To 15μL |
2. 65度保溫5~10分鐘，然后立刻放冰上
3. 反應管中加入如下試劑
| 15μL | Heat denatured RNA from step 1 (above) |
| 2μL | 10X Phosphatase Reaction Buffer |
| 2.5~5 units | Alkaline Phosphatasae, TAB5 |
| 20 units | RNase inhibitor (Recommend) |
| 20μL | Total reaction volume |
4. 37度保溫30分鐘
5. 選用下列一種方式終止反應：
A）直接放入-20度或-70度冰箱；
B）加入EDTA至終濃度大于2mM；
C）酚氯仿抽提，然后鹽/醇沉淀RNA
儲藏溫度：-20℃
質(zhì)控檢測：無(wú)DNase、Nickase、RNase污染
純度：SDS-PAGE純度：大于90%
1. Maria Rina, Charalambos Pozidis, et al. Eur. J. Biochem. 267, 1230-1238 (2000).
2. Ellen Wang, Dimitris Koutsioulis, et al. J. Mol. Biol. 366, 1318-1331(2007).
3. Ping Li, Jon Beckwith, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.85,7685-7689(1988).