產(chǎn)品描述: T4 RNA Ligase 2,也稱(chēng)為 T4 Rnl 2,具有分子間和分子內 RNA 連接活性。T4 RNA Ligase 2 連接雙鏈 RNA 缺口的活性比連接單鏈 RNA 缺口的活性更高。該酶可連接相鄰的 5'-磷酸和 3'-羥基。在雙鏈結構中,該酶還可以連接 RNA 的 3'-羥基和 DNA 的 5'–磷酸。
規格: 10U/μL
活性單位定義: 一個(gè)單位定義為:在 20μL 反應體系中,37°C 孵育 30 分鐘,將 0.8μg 等摩爾比的 28-mer 和 18-mer RNA 進(jìn)行連接,連接 50% 所用的酶量。
酶存儲緩沖液: 10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 35mM (NH4)2SO4, 0.1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50%(v/v) Glycerol, pH7.5@25℃.
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T4 RNA ligase 1,T4 RNA ligase 2,RNaseR 在環(huán)狀 RNA 酶法合成上的應用:
IVT 反應得到線(xiàn)性 RNA:值得注意的是,此步 IVT 反應,需要摻入一定比例的 GMP,獲得含 GMP 的線(xiàn)性 RNA;
RNA 環(huán)化:通過(guò) T4 RNA 連接酶 1(T4 Rnl 1)或 T4 RNA 連接酶 2(T4 Rnl 2)催化 RNA 末端 5'-磷酸和 3'-羥基的連接,將 RNA 分子內兩端連接產(chǎn)生環(huán)狀 RNA;
去除線(xiàn)性 RNA:RNaseR 能夠去除反應液中的所有線(xiàn)性 RNA 分子,從而得到無(wú)線(xiàn)性 RNA 的環(huán)狀 RNA。
注意:T4 RNA ligase 2 的反應體系中需要加入 ATP,可使用 ATP,100mM Solution,Cat#R1331。
儲藏條件: Stored at -20±5℃. Do not store in a frost-free freezer. Always avoid freeze-thaw cycles or exposure to frequent temperaturechanges. These fluctuations can greatly alter product stability.
質(zhì)控檢測:
1. Contaminant Assay: Free of Endonuclease, Exonuclease and RNase activities.
2. Endotoxin Assay: Pass.
3. Physical Purity: >95% by SDS-PAGE with Coomassie? blue staining.